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技術(shù)文獻(xiàn)

為什么可以搞到全球這么多細(xì)胞庫污染?

文字:[大][中][小] 2020-4-22    瀏覽次數(shù):238    

     全球平均有約15~35%細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室發(fā)生支原體污染(65~80%嚴(yán)重污染),超過一半實(shí)驗(yàn)室有兩種支原體污染;而全球各地的細(xì)胞庫中,也有發(fā)現(xiàn)5~35%不等的支原體感染率,日本甚至高達(dá)60%。


   但!全球目前有在做常規(guī)支原體監(jiān)控的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室卻不到50%!



為什么可以搞到全球這么多細(xì)胞庫污染?


   

支原體體積非常小, 極易通過0.22um濾膜, 且一般光學(xué)顯微鏡無法觀察到。


   支原體能附著并存活在器物表面(操作臺(tái), 培養(yǎng)箱,顯微鏡等), 提高操作污染概率。


   支原體生長緩慢,通常不破壞宿主細(xì)胞但默默改變了細(xì)胞生長代謝,且對(duì)傳統(tǒng)抗生素具抗性,因?yàn)榭股卮蠖嗥茐募?xì)菌細(xì)胞壁, 而支原體恰恰沒有細(xì)胞壁。


   支原體污染初期, 培養(yǎng)基不變色, 細(xì)胞形態(tài)正常,但等大量污染時(shí), 為時(shí)已晚, 耗時(shí)又耗力。


   你說,支原體煩不煩!


   目前檢測(cè)方法可大致分成四種:


   ■微生物培養(yǎng)法


   將樣品培養(yǎng)在特殊瓊脂培養(yǎng)基上,在37?C有氧環(huán)境中孵育2周,陽性培養(yǎng)基上會(huì)長出100~400um大小的“煎蛋狀”菌落。


   ■DNA螢光染色法


   支原體DNA中A-T含量占多數(shù)(55~80%),容易被Hoechst 33258此熒光劑染上,被支原體污染之細(xì)胞經(jīng)染色后,在細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一之螢光小點(diǎn)。


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