技術(shù)文獻(xiàn)
技術(shù)文獻(xiàn)
全球平均有約15~35%細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室發(fā)生支原體污染(65~80%嚴(yán)重污染),超過一半實(shí)驗(yàn)室有兩種支原體污染;而全球各地的細(xì)胞庫中,也有發(fā)現(xiàn)5~35%不等的支原體感染率,日本甚至高達(dá)60%。
但!全球目前有在做常規(guī)支原體監(jiān)控的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室卻不到50%!
為什么可以搞到全球這么多細(xì)胞庫污染?
支原體體積非常小, 極易通過0.22um濾膜, 且一般光學(xué)顯微鏡無法觀察到。
支原體能附著并存活在器物表面(操作臺(tái), 培養(yǎng)箱,顯微鏡等), 提高操作污染概率。
支原體生長緩慢,通常不破壞宿主細(xì)胞但默默改變了細(xì)胞生長代謝,且對(duì)傳統(tǒng)抗生素具抗性,因?yàn)榭股卮蠖嗥茐募?xì)菌細(xì)胞壁, 而支原體恰恰沒有細(xì)胞壁。
支原體污染初期, 培養(yǎng)基不變色, 細(xì)胞形態(tài)正常,但等大量污染時(shí), 為時(shí)已晚, 耗時(shí)又耗力。
你說,支原體煩不煩!
目前檢測(cè)方法可大致分成四種:
■微生物培養(yǎng)法
將樣品培養(yǎng)在特殊瓊脂培養(yǎng)基上,在37?C有氧環(huán)境中孵育2周,陽性培養(yǎng)基上會(huì)長出100~400um大小的“煎蛋狀”菌落。
■DNA螢光染色法
支原體DNA中A-T含量占多數(shù)(55~80%),容易被Hoechst 33258此熒光劑染上,被支原體污染之細(xì)胞經(jīng)染色后,在細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一之螢光小點(diǎn)。