技術(shù)文獻(xiàn)
技術(shù)文獻(xiàn)
產(chǎn)品僅用于科研一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號(hào)16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
原人參三醇(PPT) 20(S)-Protopanaxtriol(PPT) 34080-08-5
原薯蕷皂苷 Protodioscin 55056-80-9
原偽金絲桃素 Protopseudohypericin 54328-09-5
遠(yuǎn)志酸 Polygalacic acid 22338-71-2
遠(yuǎn)志皂苷元 Senegenin 2469-34-3
蕓香柚皮苷 Narirutin 14259-46-2
8-O-乙酰山梔苷甲酯 8-O-acetylshanzhiside methyl ester 57420-46-9
銀杏酸(13:1) Ginkgolic Acid (C13:1) 20261-38-5
銀杏酸(15:1) Ginkgolic acid (C15:1) 22910-60-7
銀杏酸(17:1) Ginkgolic acid (C17:1) 111047-30-4
異連翹酯苷A Isoforsythiaside 1357910-26-9
洋川芎內(nèi)酯H Senkyunolide H 94596-27-7
異黃芪皂苷Ⅰ Isoastragaloside I 84676-88-0
異黃芪皂苷Ⅱ Isoastragaloside Ⅱ 86764-11-6
煙酸 Nicotinic acid 59-67-6
硬脂酸 Stearic acid 1957/11/4
乙酰黃芪皂苷Ⅰ AcetytastragalosideⅠ 84687-47-8
鹽酸益母草堿 Leonurine hydrochloride 24697-74-3
乙氧基白屈菜紅堿 5-Ethoxychelerthrine 79559-55-0
藥根堿 Jatrorrhizine 3621-38-3
小檗堿 Berberine 633-65-8
香草酸 Vanillic acid 121-34-6
香葉木苷 Diosimin 520-27-4