口蹄疫（foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）由口蹄疫病毒（FMDV）引起
的多種偶蹄動(dòng)物高度接觸性傳染病。口蹄疫病毒屬于小核糖核酸病毒科口蹄疫病
毒屬，病毒基因組為單股正鏈 RNA，約含 8500 個(gè)核苷酸。目前已知該病毒有 7
個(gè)血清型，分別為 O、A、C、Asial、SATl、SAT2 和 SAT3，每種血清型包括
多個(gè)亞型，各型之間無交叉保護(hù)。我國及周邊國家流行 O 型、A 型和 Asial 型 3
種血清的 FMDV?？谔阋卟?duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)危害性極大，是世界各國檢測(cè)和防疫
的重點(diǎn)對(duì)象。由于 FMDV 傳代速度快且有多種傳播途徑，特別是康復(fù)和亞臨床
感染動(dòng)物及其畜產(chǎn)品（主要為肉、奶類）帶毒，給 FMD 的防疫工作帶來諸多困
難。目前檢測(cè) FMD 常用技術(shù)主要有動(dòng)物接種，病毒分離和血清學(xué)試驗(yàn)等，這些
方法有的費(fèi)時(shí)費(fèi)力，有的存在非特異性反應(yīng)和敏感度低等缺點(diǎn)。
本公司針對(duì) O 型 FMDV 設(shè)計(jì)了特異性檢測(cè)引物，建立了檢測(cè) FMDV 的
RT-PCR 方法，敏感度更高。它具有下列特點(diǎn)：
1. 用于 O 型 FMDV 的定性鑒定檢測(cè)和分子流行病學(xué)調(diào)查。
2. 能對(duì)樣品中 FMDV 進(jìn)行快速檢測(cè)，具有良好的特異性和敏感性。
3. 使用一管式 RT-PCR 試劑盒，減少了操作步驟，降低了操作誤差。

運(yùn)輸及保存:

使用方法:

一、樣品 RNA 的制備
用自選方法純化 O 型 FMDV 樣品的 RNA，也可以另購本公司的一管式病
毒 RANout 或柱式病毒 RNAout，上述兩款產(chǎn)品跟本試劑盒兼容。
二、陽性對(duì)照
1. 為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)
照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。
2. 使用本陽性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。
最好在專門的區(qū)域操作。
三、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（30 uL 體系）
3. 在 PCR 管中加入下列成分：
成 份 樣品 陽性對(duì)照 陰性對(duì)照
雙酶一管式 RT-PCR Buffer，2× 15 uL 15 uL 15 uL
O 型 FMDV 專一性引物對(duì) 2 uL 2 uL 2 uL
樣品 RNA 1-5 uL 無 無
O 型 FMDV 陽性對(duì)照 無 2 uL 無
補(bǔ)超純水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 輕柔混勻后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 RT-PCR。
過程 溫度 時(shí)間
逆轉(zhuǎn)錄 60℃ 30 分鐘
預(yù)變性 95℃ 5 分鐘
PCR 反應(yīng)
（30 個(gè)循環(huán)）
94℃ 30 s
61℃ 40 s
72℃ 1 分鐘
延伸 72℃ 10 分鐘
5. 電泳檢測(cè) RT-PCR 產(chǎn)物。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 402 bp。