技術文獻
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透明質酸A使用什么檢測方法更精確
透明質酸A在大多數情況下都是選擇用放射免疫的方法來檢測,包括臨床上也經常選擇使用放免的方法來測透明質酸A,那么放免的原理具體是什么,檢測靈敏度是多少?
透明質酸(Hyaluronic Acid, HA)是一種廣泛存在于細胞外基質中的高分子多糖,主要由肝內皮細胞進行降解。肝組織正常結構受到損傷時,一方面 HA 的合成增加,另一方面肝臟對 HA 的降解能力下降,導致血清中 HA 水平明顯增高,并且增高的程度與肝組織炎癥及纖維化程度呈正相關。
急性肝炎、慢性活動性肝炎、肝硬化以及肝癌都導致血清 HA 水平增高,某些惡性腫瘤、肺心病患者的血清 HA 水平也會增高。慢性肝炎在用干擾素或激素進行治療時,伴有血清 HA 水平下調。胚胎兒血清 HA 極高,新生兒血清 HA 仍維持在較高水平,隨著年齡增長血清 HA 逐漸降低,到中、老年又略有升高。
血清 HA 水平是反映肝纖維化的重要指標,也可用于抗纖維化藥物治療時的動態(tài)觀察。
本方法采用競爭放射免疫分析法,即標準或待測樣品中的 HA 和125I-HA 共同與限量的透明質酸結合蛋白(Hyaluronic Acid BindingProtein, HABP)在適宜的條件下進行競爭性結合反應。一部分 125I-HA125與 HABP 結合形成復合物,而另一部分呈游離狀態(tài)。 I-HA 與 HABP
結合的比例取決于標準或待測樣品中非標記 HA 的含量,非標記 HA的含量越高,125I-HA 與 HABP 形成的復合物越少。HA-HABP 復合物與 HABP 抗體和第二抗體形成交聯(lián)的聚合物沉淀下來,測定沉淀物的放射性計數。經過適當的數據處理后可獲得標準曲線,從標準曲線
上查出被測樣品的 HA 含量(數據可由計算機自動處理)。
【適用儀器】
適用于各類γ-放射免疫分析儀。
【血樣處理】
取靜脈血分離血清,48 小時內測量可在 2~8℃密閉保存;超過 48
小時-20℃密閉冷凍保存,至少穩(wěn)定 2 個月,但要避免反復凍融。
【本藥盒的主要技術指標 】
1. 測定范圍:25~800ng/ml;
2. 靈敏度:5.5ng/ml;
3. 精密度:批內變異 CV<10%;批間變異 CV<15%。
【注意事項】收到藥盒后盡快存放在 2-8℃保存,使用前應平衡至室
溫,加試劑前必須搖勻。
1. 操作前請仔細閱讀說明書,不同批號的試劑不得混用。
2. 加樣操作應快速準確手法一致,盡量縮短整個加樣時間。一
批測定中管數不宜過多,以加入 HABP 前后管相差在 5 分鐘
內為宜,嚴格控制每步反應的時間和溫度。
3. 加樣頭不可混用,以免交叉污染。
4. 加標準品、質控或樣品時注意將樣本加到試管底部;加標記
物時加樣頭不要碰到液面;加抗體時加樣頭應在液面之上約
1cm 以免交叉污染。
5. 溫浴之前應充分混合均勻
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