異源曼氏桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用方法：

一、樣品DNA的制備

用自選方法提取細菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。產(chǎn)品僅用于科研

二、制備O157:H7標準曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。

1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。

2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。

3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。

4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。

5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。

6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。

7. NC管中不加任何陽性對照。

8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標準曲線。

犬抑制素β-B(Inhbb)elisa檢測試劑盒
犬乙型肝炎表面抗原(HBsAg)elisa檢測試劑盒
犬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)elisa檢測試劑盒
犬胰腺甘油三酯脂酶(PNLIP)elisa檢測試劑盒
犬胰高血糖素樣肽1(GLP1)elisa檢測試劑盒
犬胰島素原(PI)elisa檢測試劑盒
犬胰島素樣因子3(INSL3)elisa檢測試劑盒
犬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)elisa檢測試劑盒
犬胰島素樣生長因子II(IGF2)elisa檢測試劑盒
犬胰島素樣生長因子1(IGF1)elisa檢測試劑盒
犬胰島素受體β(ISR-β)elisa檢測試劑盒
犬胰島素(INS)elisa檢測試劑盒
犬胰蛋白酶原激活肽(TAP)elisa檢測試劑盒
犬胰蛋白酶原-1 elisa檢測試劑盒
犬胰蛋白酶(trypsin)elisa檢測試劑盒
犬一氧化氮(NO)elisa檢測試劑盒
犬葉酸(FA)elisa檢測試劑盒
犬血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)elisa檢測試劑盒
犬血纖蛋白原(Fbg)elisa檢測試劑盒
犬血栓素B2(TXB2)elisa檢測試劑盒