技術(shù)文獻(xiàn)
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泛醇細(xì)胞色素C還原酶核心蛋白Ⅰ(UQCRC1)ELISA試劑盒操作步驟:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。
小鼠Foxp3(mouse Foxp3)
小鼠半乳糖凝集素-9(mouse Galectin-9)
小鼠胃泌素(mouse Gastrin)
小鼠Ghrelin(mouse Ghrelin)
小鼠胰高血糖素樣肽-1(mouse GLP-1)
小鼠胰高血糖素(mouse Glucagon)
小鼠GRO(mouse GRO)
小鼠神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞衍化營(yíng)養(yǎng)因子(mouse GDNF)
小鼠生長(zhǎng)因子(mouse GH)
小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子3(mouse GATA3)
小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子4(mouse GATA4)
小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(mouse HIF-1α)
小鼠熱休克蛋白60(mouse Hsp-60)
小鼠組胺(mouse HIS)
小鼠肝生素(mouse HGF)
小鼠糖化血紅蛋白(mouse HbA1c)
小鼠組胺(mouse Histamine)
小鼠熱休克蛋白70(mouse HSP70)
小鼠羥脯氨酸(mouse HYP)
小鼠高遷移率族蛋白(mouse HMGB1)
小鼠可溶性細(xì)胞間粘附分子-1 (mouse sICAM-1)
小鼠干擾素-a(mouse IFN-a)
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。
小鼠Foxp3(mouse Foxp3)
小鼠半乳糖凝集素-9(mouse Galectin-9)
小鼠胃泌素(mouse Gastrin)
小鼠Ghrelin(mouse Ghrelin)
小鼠胰高血糖素樣肽-1(mouse GLP-1)
小鼠胰高血糖素(mouse Glucagon)
小鼠GRO(mouse GRO)
小鼠神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞衍化營(yíng)養(yǎng)因子(mouse GDNF)
小鼠生長(zhǎng)因子(mouse GH)
小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子3(mouse GATA3)
小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子4(mouse GATA4)
小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(mouse HIF-1α)
小鼠熱休克蛋白60(mouse Hsp-60)
小鼠組胺(mouse HIS)
小鼠肝生素(mouse HGF)
小鼠糖化血紅蛋白(mouse HbA1c)
小鼠組胺(mouse Histamine)
小鼠熱休克蛋白70(mouse HSP70)
小鼠羥脯氨酸(mouse HYP)
小鼠高遷移率族蛋白(mouse HMGB1)
小鼠可溶性細(xì)胞間粘附分子-1 (mouse sICAM-1)
小鼠干擾素-a(mouse IFN-a)
小鼠IgM(mouse IgM)
小鼠白介素-1a(mouse IL-1a)
小鼠白介素-1b(mouse IL-1b)
小鼠白介素-1RA(mouse IL-1ra)
小鼠白介素-2(mouse IL-2)
小鼠可溶性白介素-2受體(mouse sIL-2R)
小鼠白介素-3(mouse IL-3)
小鼠白介素-4(mouse IL-4)
小鼠白介素-5(mouse IL-5)
小鼠白介素-6(mouse IL-6)
小鼠白介素-7(mouse IL-7)
小鼠白介素-8(mouse IL-8)
小鼠白介素-9(mouse IL-9)
小鼠白介素-10(mouse IL-10)
小鼠白介素-12(mouse IL-12)
小鼠白介素-13(mouse IL-13)
小鼠白介素-15(mouse IL-15)
小鼠白介素-17(mouse IL-17)
小鼠白介素-18(mouse IL-18)
小鼠白介素-23(mouse IL-23)
小鼠白介素-27(mouse IL-27)
小鼠胰島素(mouse Insulin)
小鼠抑制素A(mouse Inhibin A)
小鼠抑制素B(mouse Inhibin B)
小鼠白介素-1a(mouse IL-1a)
小鼠白介素-1b(mouse IL-1b)
小鼠白介素-1RA(mouse IL-1ra)
小鼠白介素-2(mouse IL-2)
小鼠可溶性白介素-2受體(mouse sIL-2R)
小鼠白介素-3(mouse IL-3)
小鼠白介素-4(mouse IL-4)
小鼠白介素-5(mouse IL-5)
小鼠白介素-6(mouse IL-6)
小鼠白介素-7(mouse IL-7)
小鼠白介素-8(mouse IL-8)
小鼠白介素-9(mouse IL-9)
小鼠白介素-10(mouse IL-10)
小鼠白介素-12(mouse IL-12)
小鼠白介素-13(mouse IL-13)
小鼠白介素-15(mouse IL-15)
小鼠白介素-17(mouse IL-17)
小鼠白介素-18(mouse IL-18)
小鼠白介素-23(mouse IL-23)
小鼠白介素-27(mouse IL-27)
小鼠胰島素(mouse Insulin)
小鼠抑制素A(mouse Inhibin A)
小鼠抑制素B(mouse Inhibin B)