技術(shù)文獻(xiàn)
技術(shù)文獻(xiàn)
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的 完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。000~2000g 離心 min,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
空腸彎曲桿菌
嗜酸乳桿菌
干酪乳桿菌
耐鹽芽孢桿菌
無(wú)乳鏈球菌
德氏乳桿菌乳酸亞種(萊氏曼氏乳桿菌)
斯氏李斯特氏菌
側(cè)孢短芽孢桿菌
乳酸乳球菌乳亞種
牙齦卟啉單胞菌
菩提奇異球菌
干燥棒桿菌
屎腸球菌(屎鏈球菌)
具核梭桿菌多形亞種
脆弱擬桿菌
齒雙歧桿菌
粘性放線菌
植物乳桿菌植物亞種
遲緩愛德華氏菌
哈氏弧菌
Hydrotalea flava
萎縮芽孢桿菌
血鏈球菌
醋酸醋桿菌
伊氏李斯特氏菌
英諾克李斯特氏菌
紅曲霉
不動(dòng)桿菌
食酸菌
短波單胞菌
多頭霉
掘氏疫霉