ELISA試劑盒試驗3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此計劃，則棄去，算了另兩個陰性對照從頭核算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上計劃，則該次試驗無效。在條件許可下，應該用比色計測定吸光值，這么能夠得到客觀的數(shù)據(jù)。 現(xiàn)舉某種檢查 HBsAg的試劑盒為例,先讀出標本（sample，S）、陽性對照（P）、和陰性對照（N）的吸光值，然后進行核算。核算方法有多種，大致可分為陽性斷定值法和標本與陰性對照比值法兩類。陽性對照品HBsAg的含量標明為P=9±2ng /ml。每次試驗設2個陽性對照和3個陰性對照。

      ELISA試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復鈣人血漿，目視法簡捷明晰，但頗具主觀性。測得A值后，先核算陰性對照A值的平均數(shù)（NC X ）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個平均數(shù)的差（P-N）有必要大于一個特定的數(shù)值（例0.400），試驗才有用。

        ELISA試劑盒陽性斷定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對許多標本的試驗檢查而得到的。ELISA試劑盒陽性斷定值（cut-off value）一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù)，以此作為區(qū)別作用陽性或陰性的規(guī)范。用此法區(qū)別作用央求試驗條件非常穩(wěn)定，試劑的制備有必要規(guī)范化，陽性和陰性的對照品應符合一定的規(guī)范，須配用精密的儀器，并嚴重按規(guī)則操作。